单克隆抗体的制备

 

来源公众号：育林手札

    选择性必修三是生物技术与工程，介绍了很多生物技术，其实，一种新技术的产生必定是原来的技术不能满足人们的需求。所以在讲一种新技术前，需要先让学生明确原来技术的缺陷。

    讲单克隆抗体制备之前，首先明确传统抗体制作方法的缺陷：

那么生产纯度高、特异性强、灵敏度高的抗体就成了研究的目的。而这成就了米尔斯坦和科勒。

有了方案，接下来就要发挥学生的能动性啦。设计学生活动，模拟新冠病毒单克隆抗体的制备过程，提高学生建模能力。情境：新冠病毒上有很多的抗原表位，能够刺激机体产生多种抗体。

【学生活动】：设计能得到产量高、纯度高、特异性强的新冠病毒抗体的方案。用细胞模型图、箭头配文字以流程图的形式表示，细胞模型图如下：

要舍得给学生时间真做，千万不要怕浪费时间，要不设计这个活动的意义就不大了。学生做完后进行展示解说，做出评价。在接下来的过程中，让学生不断修改和完善其模型。

思考1：如何获得能产生针对新冠病毒的B淋巴细胞？怎样获取细胞？

将获取的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合：

思考2：诱导融合后得到的细胞有几类？（融合的细胞仅考虑两两融合）

思考3：哪种细胞是我们需要的？如何进行选择？

【资料1】

DNA合成可分为两种途径，

一是从头合成途径（D途径），利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤（A）阻断；

二是补救合成途径（S途径），在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）存在下利用次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶（T）。

B淋巴细胞中这两种DNA的合成途径都有，而鼠骨髓瘤细胞中只有D途径。

【资料2】

HAT培养基里的三种成分：H是次黄嘌呤，A是氨基蝶呤，T是胸腺嘧啶核苷。

HAT培养基中加入氨基蝶呤的目的是抑制核苷酸合成主通路；

加入次黄嘌呤与胸腺嘧啶核苷的目的是为核苷酸合成旁路提供原料。

思考4：结合资料1、2分析，如何选择出我们需要的杂交瘤细胞？

思考5.经过筛选，获得我们需要的杂交瘤细胞了吗？接下来如何筛选才能获得我们需要的杂交瘤细胞？

【资料】有限稀释法——通过逐步稀释得到一定体积内只有1个或少量细胞的方法。

此处需要结合动画解释克隆化培养和抗体检测。

思考6.如何获取大量所需杂交瘤细胞？

最后，选择能产生针对抗原表位1抗体的杂交瘤细胞还是针对抗原表位2抗体的杂交瘤细胞，需要对抗体亲和力、中和活性、特异性等进行测定，如果需要可以找相关的文献进行补充。

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