DNA的粗提取与鉴定实验的31个为什么

 

来源公众号：格物致知站　作者：意在沛

  31个为什么

1.真核细胞中DNA主要存在于哪里？

真核细胞中DNA主要存在于细胞核中，常与蛋白质共同构成染色质。

2.能取哺乳动物成熟红细胞作为实验材料吗？为什么？

不能。因为哺乳动物成熟红细胞没有细胞核和众多细胞器。

3.能取鸟类的红细胞作为实验材料吗？为什么？

可以。因为鸟类的红细胞有细胞核，DNA含量多。

4.能作为DNA的粗提取与鉴定实验的材料的关键要素是什么？

含有细胞核，DNA含量相对高。洋葱、香蕉、菠菜、鸡肝等都是优秀的实验材料。

5. 研磨液的成分有哪些？

成分有：Tris（三羟甲基氨基甲烷）、蒸馏水、HCl、NaCl、EDTA（乙二胺四乙酸）、SDS（十二烷基硫酸钠）。

6.研磨液的作用是什么？

HCl用于调配PH至8.0；Tris（三羟甲基氨基甲烷）提供缓冲体系，使DNA在缓冲体系中呈稳定状态；EDTA（乙二胺四乙酸）用于抑制DNA酶活性，防止DNA被水解；SDS（十二烷基硫酸钠）用于使蛋白质变性，结构变松散，更利于与DNA分离。

7.DNA的粗提取实验原理是什么？

DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2mol/LNaCl溶液中DNA的溶解度最高。

8.从DNA溶解曲线图中可知，DNA在NaCl浓度不高时，即接近清水时溶解度也高呀，为什么用2mol/LNaCl溶液提取DNA而不用清水提取？

因为，能溶解于清水的物质有很多种，而能溶解于2mol/LNaCl溶液的物质不多，就DNA，从而达到提取目的。

9.DNA的粗提取除杂原理是什么？

DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。

10.DNA的鉴定原理是什么？

在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。

11.DNA的粗提取步骤是怎样的？

研磨裂解→分离DNA→析出DNA→溶解鉴定

12.研磨的目的是什么？

破碎细胞，使细胞核中的物质易溶解在研磨液中。

13.为了让研磨更充分，对于植物材料可以再添加什么？

可以加入适量的纤维素酶和果胶酶。

14.为了让研磨更充分，对于动物材料可以再添加什么？

添加蒸馏水，让细胞吸水涨破。

15.研磨后过滤时为什么用纱布而不用滤纸？

因为滤纸会吸附DNA。

16.研磨结束后取滤液的上清液还是取沉淀物？

取上清液。

17.获取上清液除了用过滤还有别的方法吗？

还可以离心。

18. 上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？

可能含有蛋白质、脂质、多糖等杂质。

19. 研磨滤液要在4 ℃低温放置几分钟的作用是什么？

抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出。

20.为什么要在上清液中加入预冷的体积分数为95%的酒精？

让DNA析出，因为DNA不溶于酒精。

21.在析出DNA步骤中为什么要将酒精预冷？

低温抑制核酸水解酶活性，抑制DNA降解；低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。 

22.搅拌时应轻缓、并沿一个方向的原因是什么？

减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子。

23.析出DNA步骤中除了搅拌外还有别的方法吗？

还可以离心。

24.析出DNA步骤中离心后取上清液还是取沉淀物？

取沉淀物。

25.溶解鉴定步骤中为什么准备两支试管？

形成对照。

26.二苯胺试剂在使用时要注意什么？

二苯胺试剂要现配现用。

27.二苯胺试剂如何配制？

1.5g二苯胺，溶于100ml冰乙酸中，再加入1.5ml浓硫酸，用棕色瓶保存，临用前，取上述溶液10ml加入0.1ml体积分数为0.2%的乙醛溶液即可。

28.鉴定DNA时需要加热吗？

需要沸水浴加热。

29.整个实验有两处用到NaCl溶液，作用一样吗？

整个实验确实有两处用到NaCl溶液，第一次是配制研磨液，取8.76克NaCl与其它成分一起定容至1000mL，作用是溶解从细胞核中裂解出来的DNA；第二次是将析出的DNA溶解于2mol/LNaCl溶液中，便于滴加二苯胺试剂鉴定。

30.鉴定过程中，DNA的结构发生改变吗？

DNA的结构会发生改变，因为鉴定时进行了5分钟的沸水浴加热。

31.实验中的离心操作是差速离心吗？

不是。

感 悟

      整个实验以DNA为主角，其“旅游”路线，可描述为细胞裂解，DNA流出，DNA进入研磨液，DNA析出酒精中，DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，二苯胺试剂鉴定。整个实验两处用到NaCl溶液，整个实验过程可以不使用离心操作，也可以两次用到离心操作，但两次取液不一样。离心操作不是差速离心。

相关高考真题

1.（2023.广东卷）“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是（ D  ）

A. 裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质

B. 分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等

C. 沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度

D. 鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色

2.（2024.安徽卷）下列关于“DNA 粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ D ）

A. 实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低B. 利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNA

C. DNA在不同浓度NaC1溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物

D. 将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白质杂质

3. （2024.山东卷）关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（ A ） 

A．整个提取过程中可以不使用离心机 

B．研磨液在 4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中 

C．鉴定过程中 DNA 双螺旋结构不发生改变 

D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰

4.（2025.湖南卷）用替代的实验材料或者试剂开展下列实验，不能达成实验

目的的是（　B　）

A. A      B. B      C. C      D. D

来源网址：DNA的粗提取与鉴定实验的31个为什么