惊到了！高中生要学习10种以上PCR技术

 

原创：幕后的小白　来源公众号：PCR技术学习

近期分享了一个给研发人员培训的数字PCR的PPT，很多小伙伴找我要资料，研发技术人员和医院人员居多，但是其中竟然有多位高中生物老师。这才了解到了一个情况，现在的高中生竟然需要学习10种以上的PCR技术了。（尤其是浙江，江苏和广东！）得到这个消息，是有些吃惊的，毕竟幕后的小白直到博士期间才开始学习PCR！

看来前几天的感受：学习PCR的毕业生，都找不到工作了！不仅仅是感受了，更是未来的趋势。

本科生不仅仅掌握基础的PCR知识那么简单了。

来学习下高中生需要掌握的PCR吧！说不定过几年，小编就被高中生拍死在了沙滩上了。

来源于BiliBili的高中生物老师Raynee的培训课：

作为PCR从业者和学习者，我们不需要像高中生一样，大概理解下就好！

（下列解释不是考试答案哦，免得被误导）

1. RT-PCR，其实就是逆转录（ Reverse T ranscription – PCR ）

RT-PCR中首先经反转录酶将一条单链RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。这里容易和Real-Time PCR弄混，首字母太像了！特别注意下。就是检测RNA的PCR技术！

2. qPCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）

这里就比较简单了，就是实时荧光定量PCR。是一种可以进行定量检测的PCR技术（嗯，现在更多用于临床检测了！就是测新冠的技术。）

3. 反向PCR：（Inverse PCR， IPCR）是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段，对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。

这个概念会带来很大的疑问，PCR还能检测未知序列？其实不是这样的，这个技术其实是一种文库构建技术，后续的检测还是要依赖于测序的。

反向PCR设计之初是为了用于确定邻近未知区域的序列，多用于研究基因的启动子序列，致癌性染色体重排，如基因融合、易位和转座，以及病毒基因整合，现在也常用于定点突变，复制一个具有预期突变的质粒。

使用反向PCR来扩增和鉴定临近未知区域序列（来源网络）

4. 融合PCR: （Fusion PCR 也称重叠延伸PCR），其原理是利用具有重叠序列的引物进行多次 PCR 反应，最终将不同的 DNA 片段融合在一起。是一种构建载体的PCR技术方式，和重叠PCR（Overlap PCR）类似，哈哈哈，又多一种PCR。

图：简单看看就行了，别纠结！用到了再仔细研究，记住做同源重组的就OK了！

5. 大引物PCR:(比较好玩，其实就是第一轮的产物作为了第二轮的引物)，一种定点突变载体构建技术。哎，我都是用现成的试剂盒！

大引物PCR需要用到三条引物进行两轮PCR，这三条引物分别是突变上游引物、常规上游引物和常规下游引物。图示，第一轮PCR利用突变上游引物和常规下游引物进行扩增，得到不完整的含有突变位点的DNA片段（先搞出来一段）；第二轮PCR利用第一轮扩增产物中的一条DNA链作为下游大引物，它与常规上游引物一起扩增得到完整的含有突变位点的DNA片段。（再补充完整）！

6. 双温PCR：个有点尬，其实就是退火延申二合一的扩增程序，现在大多数都是这么搞的！（比较快！）

7. 热启动PCR: 虽然PCR在常规温度下几乎无法扩增，但是也只是几乎，其实生化反应一直在动态平衡中进行着；常规的酶在低温下也是会发生反应的（虽然效率低一些）。为了解决因这个低效的非特异性扩增，对DNA聚合酶修饰下，比如抗体或化学，只有高温加热后，才能启动酶的活性，这就是热启动PCR。可以解决酶的非特异性，其实就是热启动酶！

8. 多重PCR：一管大于等于两个靶标同时检测，嗯！就是这样。

9. 递减PCR：Touch Down PCR,也是一种减少非特异性的PCR程序。解决引物特异性和扩增效率冲突的技术方案。常规而言，温度越高，特异性越高，扩增效率降低；温度越低，特异性越差，扩增效率升高。这是就可以采用前面一些循环温度高一些，后面一些循环温度降下来的方法！

10. 随机PCR：嗯，随机引物建库的！测序的都知道。当然，还有亲子鉴定哦（DNA指纹图谱）

今天的PCR有点乱，所有的PCR都是解决一种问题的，并不是不可变的，以问题出发，可以多种变化！这样的PCR才是研发人该做的。

如果要以名称来学，太多太多了：(现在的研究生有点懒，PCR实验都外包了)新技术参考：STEM-PCR，get-dPCR，tp-PCR，im-PCR，im-dPCR，这些个PCR的新技术，都是啥？

来源网址：惊到了！高中生要学习10种以上PCR技术