教材中各种“去核法”

 

来源公众号：生命教育观察

01 各种方法的原理、过程及特点

显微操作法

01 原理：利用显微操作仪的高精度操作，在显微镜下将卵母细胞固定，然后使用微型吸管将卵母细胞的核和第一极体一并吸出。

02 过程：首先将卵母细胞固定在显微镜下的特定位置，然后通过显微操作仪的精细控制，将微型吸管插入卵母细胞，准确地吸出细胞核和第一极体。

03 特点：精准可控，但技术难度高，需专业设备。是目前核移植技术的主流方法。

梯度离心法

01 原理：利用离心力使细胞内的细胞核向上浮动到梯度的顶部，从而实现细胞核与细胞质的分离。

02 过程：将卵母细胞置于梯度离心机中，设置适当的离心力和时间，使细胞核在离心力的作用下移动到特定位置，然后通过切割或吸出的方式将细胞核分离出来。

03 特点：无需穿透透明带，但可能损伤细胞结构。效率较低，多用于实验研究。

紫外线短时间照射法

01 原理：紫外线具有较高的能量，能够破坏DNA的结构，使其失去活性。通过短时间照射卵母细胞的核部位，使核内的DNA变性，从而达到去核的目的。

02 过程：使用紫外线灯或紫外线发生器，对卵母细胞的核部位进行精确的短时间照射，照射后核内的DNA结构被破坏，失去活性，可以进一步处理或丢弃。

03 特点：操作简便，但需严格控制照射时间和强度。可能对细胞质成分造成损伤。

化学物质处理法

01 原理：某些化学物质能够与DNA结合或影响其结构，使其变性或失去活性。通过使用特定的化学试剂处理卵母细胞，使细胞核内的DNA发生变性，从而实现去核。

02 过程：将卵母细胞置于含有特定化学物质的溶液中，经过一定时间的处理，使细胞核内的DNA变性，然后可以进一步进行其他操作。

03 特点：无需物理操作，但试剂浓度和作用时间需精确控制。可能影响细胞后续发育潜能。

02 方法对比与选择

方法	去核精度	技术难度	适用场景	典型案例
显微操作法	★★★★☆	高	科研与克隆动物生产	克隆羊 “多利”
梯度离心法	★★☆☆☆	中	批量处理或细胞质研究	小鼠卵母细胞去核
紫外线照射	★☆☆☆☆	低	初步实验或 DNA 损伤研究	鱼类胚胎去核
化学处理法	★★★☆☆	中	大规模生产或特定物种	牛、猪卵母细胞去核

03 共同特点

所有方法均需在不破坏透明带的前提下操作，原因如下：

01 结构保护：透明带是卵母细胞外的糖蛋白层，防止物理损伤和细菌感染。

02 功能维持：透明带参与精子识别和防止多精受精，保留其完整性对后续胚胎发育至关重要。

03 操作限制：显微操作针通过透明带的天然缝隙插入，化学物质通过扩散穿透，紫外线则利用其弱穿透性仅作用于核区。

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